Tolerância de microrganismos eucariotos ao herbicida glifosato / Tolerance of eukaryotic microorganisms to glyphosate herbicide

O glifosato é um herbicida amplamente utilizado. A Organização Mundial da Saúde (OMS) reclassificou o glifosato como "provavelmente cancerígeno a humanos". A remoção do glifosato do ambiente pode ser realizada por ação enzimática microbiana. O presente trabalho enfocou o isolamento de microrganismos do solo capazes de tolerar glifosato como única fonte de carbono. As células foram isoladas em meio de cultivo mínimo suplementado com glifosato. Foram isoladas 17 bactérias, 14 fungos e 1 levedura. Foi verificada a produção da biomassa microbiana na presença e na ausência do glifosato. Um fungo (F3) e uma levedura (L1) foram selecionados após teste de tolerância ao glifosato em meio líquido. Os microrganismos toleraram o glifosato, entretanto, o metabolismo foi afetado pelo herbicida, comparado ao controle sem glifosato. Estatisticamente, o tempo de crescimento apresentou diferenças significativas. Microrganismos eucarióticos isolados de solo com glifosato são tolerantes ao composto e podem ser úteis como biorremediadores de ambientes afetados por este herbicida.(AU)

Glyphosate is one of the most widely used herbicides. The World Health Organization (WHO) has reclassified glyphosate as "probably carcinogenic to humans". Glyphosate removal from the environment can be performed by microbial enzymatic action. The present work focused on the isolation of soil microorganisms that can tolerate glyphosate as the sole carbon source. Cells were isolated in minimal culture medium supplemented with glyphosate. Microbial biomass production was verified in the presence and absence of glyphosate. Seventeen, fourteen and one bacteria, fungi and yeast were isolated, respectively. One fungus (F3) and one yeast (L1), were selected after glyphosate tolerance test in liquid medium. Eukaryotic microorganisms tolerate glyphosate, however metabolism was affected by herbicide compared to control without glyphosate. Statistically growth time showed significant differences. Eukaryotic microorganisms isolated from soil with glyphosate are tolerant to the compound and may be useful as bioremediators of environments affected by this herbicide.(AU)

Produção e purificação integrada de protease fibrinolítica de Mucor subtilissimus UCP 1262 / Integrated production and purification of fibrinolytic protease from Mucor subtilissimus UCP 1262

As enzimas fibrinolíticas podem ser obtidas de micro-organismos por meio de processos fermentativos. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a produção e extração integrada da protease fibrinolítica de Mucor subtilissimus UCP 1262 usando sistema de duas fases aquosas (SDFA). O processo integrado foi realizado para avaliar a produção, partição e recuperação da protease fibrinolítica, segundo planejamento experimental 23, utilizando como variáveis independentes a massa molar do polietileno glicol (PEG), a concentração do PEG e a concentração do sulfato de sódio. A maior atividade fibrinolítica (15,40U/mL) foi obtida na fase rica em sulfato de sódio no ensaio composto por 10% de sal e 18% de PEG 8000 (g/mol). Recuperações superiores a 80% foram obtidas. A protease fibrinolítica apresentou pH ótimo 7,0, estabilidade entre os pH 6,0 e 8,5, temperatura ótima 50°C, sendo estável de 10°C a 50°C. A enzima foi classificada como uma serino protease, com massa molecular de 52kDa. Como resultado, o processo é notavelmente eficaz para pré-purificar a protease fibrinolítica com baixo custo e rapidez significativa. Quando comparada a outras técnicas de produção e purificação isoladas, a fermentação extrativa é um processo digno a ser substituto das etapas iniciais de separação convencionais.(AU)

Fibrinolytic enzymes can be obtained from microorganisms through fermentative processes. The study aimed to evaluate the fibrinolytic protease production and integrated extraction from Mucor subtilissimus UCP 1262 by extractive fermentation using Aqueous Two-Phase Systems (ATPS). The integrated process was carried out to assess the production, partition and fibrinolytic enzyme recovery, according to a 2 3 -experimental design, using as independent variables Polyethylene glycol (PEG) molar mass, PEG and sodium sulphate concentration, concentration. The highest fibrinolytic activity (15.40U/mL) was obtained in sodium sulfate rich phase in the assay comprising of 10% of salt and 18% of PEG 8000 (g/mol). Yield greater than 80% was obtained. The fibrinolytic protease presented optimum pH 7.0 and stability between pH 6.0 and 8.5, and optimum temperature 50°C, stable between 10°C to 50°C. The enzyme was classified as a serine-protease with 52kDa of molecular weight. As a result, the process is remarkably effective to pre-purify the fibrinolytic protease with a low cost and significantly faster processing time. When compared to other isolated production and purification techniques the extractive fermentation is worthy of being a candidate to replace the initial stages of conventional separation processes.(AU)

Factors affecting the production and regeneration of protoplasts from Colletotrichum lindemuthianum / Fatores que afetam a produção e regeneração de protoplastos de Colletotrichum lindemuthianum

The present work reports factors affecting the production and regeneration of protoplasts from Colletotrichum lindemuthianum. The usefulness of protoplast isolation is relevant for many different applications and has been principally used in procedures involving genetic manipulation. Osmotic stabilizers, lytic enzymes, incubation time and mycelial age were evaluated in terms of their effects on protoplast yield. The optimal condition for protoplast production included the incubation of young mycelia (48 h) in 0.6 mol l-1 NaCl as the osmotic stabilizer, with 30 mg ml-1 Lysing Enzymes from Trichoderma harzianum for 3 h of incubation. In these conditions protoplasts production was higher than 10(6) protoplatos ml-1 in the digestion mixture, number suitable enough for experiments of transformation in fungi. Sucrose concentrations of 1.2 mol l-1 and 1 mol l-1 were the most suitable osmotic stabilizers for the regeneration after 48 h, with rates of 16.35 percent and 14.54 percent, respectively. This study produced an efficient method for protoplast production and reverted them into a typical mycelial morphology using a Colletotrichum lindemuthianum LV115 isolate.

O presente trabalho apresenta os fatores que afetam a produção e regeneração de protoplastos de Colletotrichum lindemuthianum. O isolamento de protoplastos é muito relevante para diferentes aplicações, principalmente, em procedimentos que envolvem a manipulação genética. Estabilizadores osmóticos, enzimas líticas, tempo de incubação e idade micelial foram testados com relação ao efeito na liberação de protoplastos. As condições otimizadas para produção de protoplastos foram incubação de micélio jovem (48 h) em estabilizador osmótico NaCl 0.6 mol l-1, acrescido de 30 mg ml-1 da enzima Lysing Enzymes de Trichoderma harzianum incubado, durante 3 h. Nessas condições, a obtenção de protoplastos foi maior que 10(6) protoplatos ml-1 na mistura de digestão, número suficientemente adequado para experimentos de transformação em fungos. Sacarose nas concentrações de 1.2 mol l-1 e 1 mol l-1 foram os estabilizadores mais apropriados para a regeneração, após 48 h, sendo as taxas de regeneração de 16.35 por cento e 14.54 por cento, respectivamente. Este estudo produziu um método eficiente para produção e reversão de protoplastos à morfologia micelial típica de Colletotrichum lindemuthianum utilizando o isolado LV115.